1选胚

 

根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，**选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。

 

2.　照蛋定位

 

接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右。

 

3　接种

 

照蛋定位完毕后，即可开始接种。先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。

 

尿囊腔接种：**常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1.　5cm，接种接种材料0.　1～0.2mL。进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。

 

绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。用注射器滴加2～3滴接种物于卵窗的绒毛尿囊膜上，以透明胶纸封住卵窗。气室小孔用石腊密封，接种后的鸡胚平放在孵化箱中，卵窗向上，不要转运。

 

卵黄囊接种：适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用7号针头注射器垂直刺入约3cm，注射接种物约0.1～0.2mL。石蜡封口，继续在37℃孵化，每天翻蛋2次。

 

4　孵化和观察

 

接种后继续在37℃孵化，每天照蛋2次，死胚随时取出。一般24h内死亡的胚多因创伤或细菌污染所致，故弃去不用。24h以后死亡的胚，取出后放4℃冰箱，并作上记号。接种后的孵化时间长短随病毒种类不同而不同，一般新城疫病毒、支气管炎病毒、减蛋综合征病毒和法氏囊病毒要孵化48～120h，喉气管炎病毒、马立克氏病毒要孵化48～96h，痘病毒要孵化4～5天，脑脊髓炎病毒要孵化至小鸡出壳。

 

5　收毒

 

接种鸡胚孵化到规定时间后，应从孵化器中取出放4℃环境冷冻36h左右，或在-10℃以下速冻4h左右，但不得使鸡胚冻结，否则易发生溶血。冷冻完毕按下列步骤收毒。

 

鸡胚放于蛋盘或蛋架上，气室向上，用碘酊、酒精消毒后，以无菌镊子敲开气室蛋壳或去掉人工卵窗的透明胶纸，暴露卵膜。注意不要让卵壳碎屑掉人鸡胚内。尿囊液：气室打开后，用无菌眼科镊子慢慢撕去卵壳膜，然后夹住绒毛尿囊膜轻轻提起，用巴氏吸管刺破绒毛尿膜直接吸取尿囊液。为防止羊膜堵住吸管口，可用镊子轻轻压下羊膜及胎膜，然后再吸。每个鸡胚一般可收8ml左右尿囊液。羊水：吸完尿囊液后，可用镊子夹住羊膜，将巴氏吸管直接插入羊膜腔吸取羊水，然后再用镊子提起羊膜或压住胎儿，直至羊水收获干净。相当一部分病毒羊水和尿囊液可以混合。有些有能混合，则应将两者单收、单放。绒毛尿囊膜：如要收获整个尿囊膜，则可在消毒、打开蛋壳、撕去壳膜后，将整个卵内容物倒出，这时绒毛尿囊膜贴在卵壳内壁上，用镊子夹住将其撕脱下来即可。胚胎：消毒、打开气室卵壳后，用镊子撕破卵壳膜和绒毛尿囊膜，夹起胚胎，用剪刀剪断卵黄带，将胎儿放灭菌容器内即可。